Microscopía

Cronología del Microscopio

•        Pre microscópico: Observación y comparación, agrupación tejidos distintos.
Microscópico: 1665 Cuando Marcelo Malpighi fundador de la disciplina estudia por primera vez tejidos vivos.
Al principio se clasificaron 21 grupos de tejidos en la actualidad se redujo a 4.
Microscopía electrónica: 1932 construcción primer microscopio electrónico, brinda una rica variedad de detalles que no se conocían en su totalidad

¿QUÉ ES LA MICROSCOPÍA?

Es la ciencia que investiga los objetos que por su tamaño están fuera del rango de resolución del ojo normal, utilizando un microscopio.

 La microscopía ha avanzado mucho con el desarrollo de sofisticados microscopios que han permitido estudiar detalladamente las estructuras celulares y su funcionamiento, logrando así un gran avance de la biología molecular e importantes logros en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades que afectan a la especie humana.

El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. El tipo más común y el primero que se inventó es el microscopio óptico y es el que usamos en nuestros laboratorios clínicos. Se trata de un instrumento óptico que contiene dos o más lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción.

Tipos de Microscopios

1.      Microscopio de fluorescencia.- En este tipo, la lente que comúnmente es de vidrio es reemplazada por lentes de cuarzo, mientras que la iluminación es efectuada por medio de lámparas de mercurio, no utiliza filtros y se observa usando placas fotográficas.

2.      El microscopio digital tiene una cámara CCD adjunta y está conectada a un LCD, y a una pantalla de computadora.

3.      El microscopio estéreo, también llamado “microscopio de disección", utiliza dos objetivos y dos oculares que permiten ver un espécimen bajo ángulos por los ojos humanos formando una visión óptica de tercera dimensión.

4.      El microscopio electrónico es uno de los más avanzados e importantes tipos de microscopios con la capacidad más alta de magnificación. En los microscopios de electrones, estos son utilizados para iluminar las partículas más pequeñas. Se utilizan en los laboratorios de alta tecnología.

5.      El microscopio óptico  está constituido por una parte mecánica ,  una parte óptica y un sistema de iluminación.

Partes del Microscopio

PARTE MECANICA

• BASE:  tiene  forma de herradura y su función  es sostén , estabilidad y solidez al aparato
• BRAZO: el brazo o columna sirve de asa para sujetar y trasportar al microscopio; en el brazo o columna se localizan los tornillos macrométricos y micrométricos que se utilizan para descender o elevar la platina;
• CABEZAL O CABEZA
• REVOLVER: es un  sistema que agarra los objetos, y que rota para utilizar un objeto u otro
• UNA PLATINA: es una plataforma horizontal  con un orificio central donde se coloca la preparación que permite el paso de la iluminación;
• TORNILLOS: 1 MICROMÉTRICO Y 1 MACROMÉTRICO; son tornillos de enfoque que permiten mover la platina hacia arriba o hacia abajo, el macro métrico de forma rápida y el micrométrico de forma lenta;

PARTE ÓPTICA

• OCULARES: lente situada cerca del  ojo del observador que capta y amplía la imagen formada en los objetos.
• OBJETIVO: lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta, lo que significa que es muy importante este elemento del microscopio, es un elemento vital que permite ver a través de los oculares.
• CONDENSADOR: está formado por un lente convergente que favorece una iluminación óptima de la preparación que de esta manera determina una riqueza de los detalles y nitidez del objeto a observar, es decir aumenta el poder de resolución.

SISTEMA DE ILUMINACIÓN

• REGULADOR DE VOLTAJE: es un accesorio que en ocasiones puede venir separado del microscopio o bien integrado en el mismo. Posee un interruptor a través del cual se enciende o se apaga. Antes de prender el regulador se debe asegurar que la perilla que regula la intensidad de corriente esté en lo más bajo.
• FUENTE DE LUZ: en algunos microscopios se encuentra integrada a la base del microscopio; en otros esta lámpara no está integrada al microscopio sino que forma un accesorio. La lámpara integrada al microscopio posee un diafragma que deberá estar abierto siempre para permitir el paso de una adecuada cantidad de luz.

PREPARACION DE LAS PLACAS HISTOLOGICAS

·         Biopsia:

- Biopsia excisional - Biopsia incisional - Biopsía endoscópica - Biopsia colposcópica - Punción aspiración con aguja fina (PAAF) - Biopsia por punción con aguja gruesa.

·         Fijación

En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios post-mortem y para lograr conservar ("fijar") la forma original del tejido. Unos de los fijadores más usado es el formol al 10% (formaldehido)^.

·         Lavados

Se debe lavar el tejido para quitar el exceso de fijador.

·         Deshidratación

 La deshidratación se hace empleando diferentes soluciones de alcohol de concentración creciente.

·         Aclaramiento

En este paso se sustituye el alcohol por un disolvente de parafina. El más usado es el xilol. También el tejido pierde color y adquiere un tono acaramelado.

·         Infiltración

En este paso la muestra se coloca en parafina líquida, cabe mencionar que se debe usar parafina histológica.

La deshidratación, aclaramiento e infiltración pueden ser realizadas manualmente pero hoy en día se realizan de modo automático en máquinas específicas.

·         Inclusión

 Se forman bloques de parafina dentro de los cuales están las muestras a estudiar.

·         Microtomía

Son cortes histológicos muy delgados . Los cortes van desde 0,5 micras hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al baño de flotación y se ´pescan´ con un portaobjetos, se marcan con la fecha, el tipo de tejido y la tinción con que se van a procesar.

 ·         Tinción

Hay muchos tipos de tinciones para diferenciar en los tejidos las diferentes estructuras o sustancias.

La tinción más usada o también llamada "de rutina" es la de hematoxilina y eosina (H&E). Se usa un colorante llamado hematoxilina que tiñe las sustancias ácidas o que las contengan, como el núcleo que contiene ácido desoxirribonucleico (ADN).  La eosina amarillenta tiñe las estructuras básicas como el citoplasma y demás orgánulos eosinofílicos de la célula.

Como se mencionó anteriormente hay muchas tinciones Otros ejemplos son:

      Masson
 PAS
Plata metenamina
 Ziehl-Neelsen
 Van Gieson
  Azul alcian
 Sudán III
Rojo Congo